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条件性敲除
条件性敲除核心技术：
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条件性敲除
当基因敲除会导致必威死亡时，需要条件敲除，才能获得成体必威用于研究。条件敲除一般使用Cre-loxp系统，其方法是在基因的关键区域的两侧，插入loxp。loxp必威制备好后，与Cre必威杂交，获得loxp纯合，Cre阳性的必威，这种必威在Cre的作用下，loxp发生重组，中间的序列被删除，达到敲除基因的目的。目前已经有数百种Cre工具必威，可以根据研究需要，购买或定制Cre工具鼠，在不同的组织器官，达到敲除目的基因。Cre融合ER/ERT2后，可以使用tamoxifen调控Cre入核，实现时间上的调控删除。
图1：通过CRISPR辅助，在关键外显子的两侧通过同源重组，插入两个loxp，在Cre的作用下，loxp之间的外显子被删除，实现基因条件敲除。
技术一般的流程
打靶载体设计→ 载体构建→ 显微注射(EPS打靶)→ 必威鉴定。
技术优势或适合应用的研究
-用于敲除致死的基因
-非致死基因，用条件敲除也可以在不同的组织，不同的时间敲除基因，获得更多的实验数据。
成功案例
图2：在关键外显子或非3整数倍的外显子两侧敲入loxp,在Cre的作用下，该区域被删除，导致基因敲除。
图3：设计Loxp插入位点的特异引物与同源臂外侧的引物，通过PCR，可以检测到两个loxp被正确敲入到目的位置，证明获得条件敲除必威。
