目前必威品系已达上万种,大鼠品系也超过上千种,这些品系的繁殖性能千差万别,需要根据具体品系的特点,针对性的优化种群管理方案。依托20年的大必威种群管理经验和完善的动物设施质控体系,维通达可以根据客户需要,制定合适的扩繁方案,提供品系建立、常规扩繁、快速扩繁和活体保种等专业服务。
1. 品系建立
大必威,按照育种方式不同,分为近交系和封闭群。JAX将遗传背景不清楚的;或者首建鼠(Founder)来源于3种或以上品系;或者首建鼠是远交系(Outbred),统称为群(STOCK)。比如,STOCK按照全同胞兄妹交配20代之前,仍称为STOCK;兄妹交配20代之后,称为近交系(Inbred)。
术语 | 定义和说明 |
STOCK(群) | 一个独立的繁育群体。 |
Line(系) | 谱系明确的一群动物,且来源于同一父母。 |
Inbred strain(近交系)* | 至少连续20代兄妹交配培育而成的品系。所有动物都可追溯于同2只首建鼠。 |
Subline(亚系) | 按照近交系标准独立于原近交系繁育的一群必威。如许多常见近交系的亚系(C57BL/6J, C57BL/6N)。 |
Coisogenic(同类系) | 有一个基因改变的近交系。如许多在近交系上进行基因修饰操作后获得的品系。 |
Inbred substrain(近交亚系)* | 按照近交系标准繁育20代的亚系,或者已经明确与近交系的遗传区别(甚至是1个基因的区别)。 |
对于随机转基因和CRISPR技术产生的敲除鼠,由于插入位点/删除碱基数/拷贝数的不同,每一只founder(F0)的基因和表型可能不同。维通达可以为客户提供标准的品系建立服务,筛选到符合实验需要的基因编辑模型(品系,见下图,源于JAX)。
2. 快速扩繁
采用超数排卵的方法获得卵母细胞,通过新鲜或冷冻精子进行体外受精(IVF),将2-cell时期的受精卵胚胎移植到代孕必威体内,一代获得大量子代必威的过程。
(1) 快速扩繁服务优点:
-只需要提供精子或少量雄性必威;
-6~12周即可提供大量同批次后代;
-基因敲除或CKO必威繁育周期缩短30~50%。
序号 | 仔鼠数量 | 快速扩繁时间 | 传统扩繁时间 |
1 | 30只后代 | 6周 | 24周 |
2 | 50只后代 | 6~8周 | 24周 |
3 | 100只后代 | 8~10周 | 32周 |
4 | 150只后代 | 8~12周 | 40周 |
5 | 200只后代 | 8~12周 | 46周 |
*数据源于B6背景必威
(2)科学经济扩繁方案制定:
按照计划扩繁,获得足够数量的大必威模型,是确保实验进行的前提。维通达主要依据大必威的扩繁性能和行业认可的扩繁性能计算公式,制定科学经济的扩繁方案。
(1)基本生理参数:
-必威6~8周左右性成熟,大鼠8~10周左右性成熟
-必威孕期约3周(19~21天);大鼠孕期约3.2周(22~25天)
-首胎间隔4~6周。
-必威传一代需要3个月左右。
(2)影响扩繁速度的雌雄鼠因素:
①雄鼠,精子数量多,只要具有受精能力,一般不是限速因素;
②雌鼠,孕期3周,哺乳3~4周,窝间隔一般1.5~2个月,常常是限速因素。
(3)基因型杂合鼠的快速扩繁
使用基因阳性的雄鼠,与同背景的野生雌鼠卵(超排获得卵)作IVF快速扩繁,2个月左右即可获得100只以上的后代(根据实验需要,移植对应数量的受精卵2-cell期胚胎)。
(4)基因型纯合的快速扩繁
如果有大量的纯合基因阳性雌鼠,可以直接自然扩繁或作IVF扩繁。一般情况下没有纯合或杂合的基因阳性雌鼠,只能使用野生型雌鼠超排,作IVF获得F1杂合后代;然后到F2代才能获得纯合鼠。
(5)多基因快速扩繁
由于快速扩繁,依赖于订购大量的野生型同背景雌鼠获取卵进行IVF,即在1代时间内可以获得大量的杂合必威。对于多基因扩繁,情况会比较复杂多样,会根据客户需求(时间和成本),提供适合的方案。
3.活体保种
若短时间内不用大必威模型,也可以小规模的活体保种。根据发育性能,基因型,繁育周期,进行科学的留种和换种计划,避免出现不育,以最小的笼位数维持种群。一般必威2~4笼;大鼠3~5笼进行活体保种。