1. 基本信息
品系名称:NOD. Prkdcscid Il2rgtm1 VstTg(Csf1p –IL2)Vst/Vst
常用名:hIL2-NPG /Vst; NPG.hIL-2
背景 :NOD-scid/NcrCrl
毛色:白色
品系建立:将mouse CSF1-promoter与人Interleukn-2(IL-2)基因的CDS序列相连接,构建pcDNA3.1-CSF1P-IL2转基因载体质粒,扩增、抽提、去内毒素后,使用Hind3+Stu1双酶切线性化,回收3.1Kb目的片段进行胚胎显微注射,注射到NPG必威受精卵的原核中。在获得的子代中筛选合适表达量的阳性必威。在隔离器中,按照转基因阳性鼠配NPG必威的方式扩繁,建立商品化hIL2-NPG必威品系。
2.hIL-2 NPG表型特征
在NPG必威中表达人的IL-2细胞因子。IL-2 是一种介导白细胞之间相互作用的细胞因子,起先被称为T细胞生长因子,可刺激T细胞、NK细胞、B细胞的增殖并加强它们的功能。由于必威的IL-2与人的IL-2存在种属差异,而且在NPG这样的免疫缺陷必威中IL-2的分泌本来就减弱,所以在造血干细胞移植或免疫细胞移植建立的人源化免疫系统必威中缺乏IL-2刺激信号,致使依赖IL-2因子的细胞,尤其是NK细胞的分化发育和功能发挥受到影响。表达人IL-2的NPG必威可以促进人源化免疫系统必威T细胞、NK细胞的分化发育,增强其功能。
hIL2-NPG必威的外周血中,ELISA检测人IL-2在血清里的含量为40~70pg/ml。
以下是hIL2-NPG必威移植脐带血分离的CD34阳性造血干细胞之后主要人源免疫细胞的重建的一个实例。
▲在hIL2-NPG必威上移植CD34+造血干细胞4周后,必威外周血中人源CD45阳性细胞的比例可以达到较高水平(均值达40%以上)。在人源CD45阳性细胞中,CD56阳性的NK细胞所占比例较高,并在移植8周之后稳定维持高水平重建。
IL-2除了促进NK细胞的分化发育,对T细胞的发育也有较强的促进作用。但是由于T细胞分化发育较晚,在HSC移植12周时CD3阳性T细胞仍处在较低水平。因此,HSC移植的hIL2-NPG必威模型有约两个月的以人源NK细胞为主的窗口期(移植后4-12周)。此模型可以作为体内研究NK功能以及通过NK细胞功能发挥抗肿瘤、抗病毒作用(如ADCC作用)药效评价的理想模型。
除应用于CD34+造血干细胞移植外,hIL2-NPG必威也支持从成体PBMC分离的NK细胞的移植。经数据验证,纯化的NK细胞可在此必威上稳定维持及增殖。